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Q Focurose 6XL

价 格:询价

规 格:25ml

产 地:中国

货 号:HY2002-1

品 牌:汇研生物

使用说明:索取使用说明

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产品介绍

Q Focurose 6XL

为确保产品的性能和无忧的操作,使?#20204;?#35831;仔细阅读本手册,有任?#25105;晌是?#21672;询本公司售后技术支持或当地的销售人?#20445;?#32852;系方式见附录)。

1.产品介绍

Q Focurose 6XL适用于分离纯化蛋白、多肽、核酸等所有带电的生物分子。

特点:

a.高载量,提高产能。

b.适合于大规模生物分子的初期捕获或中度纯化。

c.纯化工艺灵活性高,可以和疏水层析组合使用。

表1:性能?#38382;?/span>

介质

Q Focurose 6XL

基质

含有葡聚糖的高度交联6%的琼脂糖

粒径范围

45-165μm

平均粒径

90μm

介质类型

强阴离子交换

带电基团

-N+(CH3)3

离子载量

180-250umol Cl-/ml 介质

pH稳定性

2-12(长期) 2-14(短期)

操作压力

0.3MPa

最大流速

700cm/h

化学稳定性

所有常用缓冲液、1.0M氢氧化钠、8.0M尿素、6.0M盐酸胍、70%乙醇

避免使用氧化剂、阴离子去污剂、阴离子缓冲液

贮存溶液

20%乙醇

贮存温度

4-30

2.离子交换介质的选择

图1:离子交换介质的选择


说明:

a.目标物所在溶液的pH?目标物的等电点?#20445;?#36873;择阳离子交换介质。

b.当目标物所在溶液的pH?目标物的等电点?#20445;?#36873;择阴离子交换介质。

c.选择离子交换介质?#20445;?#25152;有使用溶液的pH应该在离子交换介质的使用pH范围?#38405;凇?/span>

d.选择离子交换介质?#20445;?#25152;有使用溶液的pH、盐的种类、盐的浓度必?#32957;?#32500;持目标物的活性,避免目标物过酸/过碱水解、沉淀等情况。

 

3.缓冲溶液的选择

表2:阴离子交换缓冲液

pH范围

缓冲盐

浓度(mM)

?#33014;?#31163;子

pKa(25)

4.3-5.3

N-Methylpiperazine

20

Cl-

4.75

4.8-5.8

Piperazine

20

Cl-或HCOO-

5.33

6.0-7.0

Bis-Tris

20

Cl-

6.48

6.2-7.2

Bis-Tris propane

20

Cl-

6.65

7.3-8.3

Triethanolamine

20

Cl-或CH3COO-

7.76

7.6-8.6

Tris

20

Cl-

8.07

8.0-9.0

N-Methyldiethanolamine

20

SO42-

8.52

8.4-9.4

Propane 1,3-Diamino

20

Cl-

8.88

8.6-9.6

Bis-Tris propane

20

Cl-

9.10

9.0-10.0

Ethanolamine

20

Cl-

9.50

9.2-10.2

Piperazine

20

Cl-

9.73

10.0-11.0

Propane 1,3-Diamino

20

Cl-

10.55

10.6-11.6

Piperidine

20

Cl-

11.12

表3:阳离子交换缓冲液

pH范围

缓冲盐

浓度(mM)

?#33014;?#31163;子

pKa(25)

2.6-3.6

Citric acid

20

Na+

3.13

3.3-4.3

Lactic acid

50

Na+

3.86

4.3-5.3

Acetic acid

50

Na+或Li+

4.75

5.2-6.2

Methyl malonic acid

50

Na+或Li+

5.76

5.6-6.6

MES

50

Na+或Li+

6.27

6.7-7.7

Phosphate

50

Na+

7.20

7.0-8.0

HEPES

50

Na+或Li+

7.56

7.8-8.8

BICINE

50

Na+

8.33

 说明:

a.必须严格按照表2和表3的要求选择缓冲溶液的种类和浓?#21462;?/span>

b.错误的缓冲液(种类和浓度)会干扰分离效果,具体体现在影响分离?#21462;?#31163;子交换介质的载量、分离纯化过程中的pH波动等。

c.选择离子交换介质?#20445;?#25152;有使用溶液的pH应该在离子交换介质的使用pH范围?#38405;凇?/span>

d.所有缓冲液试剂必须使用分析纯或者更高纯度的试剂。

e.在溶液配制后,须经过滤(粒径≤45μm0.22μm过滤、粒径≤165μm0.45μm过滤、粒径≤300μm0.8μm过滤,避免堵塞离子交换介质)和脱气处理(影响分离效果)。

4.样品的制备

a.样品所在溶液盐的组分及pH必须和?#33014;?#28082;保持一致,可以通过用?#33014;?#28082;稀释或透析、超滤、G25进行缓冲液置换处理。

b.样品过滤(粒径≤45μm0.22μm过滤、粒径≤165μm0.45μm过滤、粒径≤300μm0.8μm过滤,避免堵塞离子交换介质)。

备注:不建议直接?#20204;?#37240;或强碱调整样品溶液的pH,可能会出现目标物的降解和失活。

5.纯化方式的选择

a.用纯化水以150cm/h的流速清洗5-10CV。

b.用?#33014;?#28082;以150cm/h的流速?#33014;?-10CV,直至UV、pH、电导平?#21462;?/span>

c.将制备好的样品加载到层析柱中。

d.用?#33014;?#28082;清洗5-10CV,直至没有物质流穿为止。

e.线性梯度洗脱(优选):线性梯度洗脱10-20CV(0%-50%洗脱液)。

  等度洗脱:在?#33014;?#28082;的基础上逐步提高?#38395;?#24230;进行洗脱,每种?#38395;?#24230;洗脱液洗脱5CV。

f.用100%洗脱液洗脱5CV。

备注?#21512;?#33073;液=洗脱液+1M NaCl,其它组分不变。

6.清洗

清洗后可以去除一些强结合性物质(例如一些强结合的蛋白、变性蛋白、脂类等),从而达?#20132;?#22797;介质的优良性能(例如载量、流动性、柱效等)。

建议每使用5-10次后进行一次清洗,具体清洗频?#24066;?#26681;据纯化的初始样品的洁净度进行调整。

a.用5CV2M NaCl以50cm/h的流速冲洗(保证接触时间为1-2h)。

b.用5CV1M NaOH以50cm/h的流速冲洗(保证接触时间为1-2h)。

c.用5CV2M NaCl以50cm/h的流速冲洗(保证接触时间为1-2h)。

d.用5CV纯化水以50cm/h的流速冲洗,直至UV、电导平?#21462;?/span>

e.用5CV保存液以50cm/h的流速冲洗后保存。

备注:保存液为20%乙醇或0.1M NaOH

7.常见问题

表4:常见问题及解决方案

问题

可能原因

解决方案

纯化时目标物不与介质结合

或结合量?#31995;?/span>

1.上样?#25239;?#36733;

降低上样量

2.上样速度过快

降低上样流速

3.蛋白或脂类在介质中聚

及时有效地清洗介质或更换新的介质

4.目标物不带电或与介质带同样的电荷

筛选合适的结合缓冲液

5.样本或?#33014;?#28082;中?#38395;?#24230;和pH不正确

检查样品和?#33014;?#28082;中的电导和pH

6.选用了错误的缓冲液

参考缓冲液选择表

7.样?#20998;?#21152;入了不合适的去污剂

检查样?#20998;?#26159;否有不合适的去污剂

洗脱时没有收集到目标物

或只收集到少量目标物

1.目标物没有与介质结合或结合量较少

?#28909;?#35748;目标物是否与介质结合

2.洗脱条件不合适

洗脱液洗脱能力不够,加大?#38395;?#24230;和调整洗脱液pH

3.洗脱时间不够

降低流速,延长洗脱液的保留时间

4.洗脱体积过小

加大洗脱体积

5.目标物在洗脱液条件下出现聚集沉淀

检测目标物在洗脱液条件(?#38395;?#24230;和pH)下的溶解度和稳定性。

目标物纯度?#31995;?/span>

 

1.样品没有经过前处理

样品上柱前必?#32973;?#32463;过离心或过滤

2.样品粘度过高

用?#33014;?#28082;适当的稀?#33073;?#21697;,降低粘?#21462;?/span>

3.洗杂不彻底

加大洗杂体积直至基线平稳并与?#33014;?#28082;一致

4.杂质蛋白或脂类在介质中聚集沉淀

及时有效地清洗介质

5.洗脱条件不佳

优化洗脱条件

6.目标物出现降解

检测目标物的稳定性

7.柱料装填效果不佳

重新装填或购买

8.分离柱顶部有较大储样体积

重新装柱或降低储样体积

9.介质中有微生物生长

介质使用完后,请及时正确保存介质

介质载量下降

1.上样速度过快

降低上样流速

2.蛋白或脂类在介质中聚集,导致载量下降。

及时清洗介质

3.使用?#38382;?#36807;多,配基被氧化或脱落

及时清洗介质或更换新介质

色谱峰上升缓慢

介质装填过紧

重新装柱

色谱峰拖尾

介质装填太松

重新装柱

柱床有裂缝或干涸

出?#20013;?#38706;或大体积气泡引入

检查管路是否有泄露或气泡,重新装柱

液流较慢

1.蛋白或脂类聚集

及时清洗介质或?#22235;?/span>

2.蛋白沉淀在介质中

调整?#33014;庖汉?#27927;脱液组分,以维持目标物的稳定性和介质的结合效率

3.分离柱中微生物生长

所用试剂必须经过过滤和脱气;

样品上柱前必须离心或过滤

8.订购信息

表5:订购信息表

产品

规格(ml)

货号

Q Focurose 6XL

25

HY2002-1

Q Focurose 6XL

100

HY2002-1

Q Focurose 6XL

500

HY2002-1

Q Focurose 6XL

1000

HY2002-1

备注:大规格包装产品或其它产品购买,请咨询本公司当地销售或售前技术支持。

9.联系方式

武汉汇研生物科技股份有限公司

地址:武汉市东湖新技术开发区流芳园?#19979;?8号新特工业园

电话:027-8777 2229

网址:www.kw830.com

邮箱:[email protected]




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