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Protein G Focurose 4FF

价 格:询价

规 格:25ml

产 地:中国

货 号:HZ1012-1

品 牌:汇研生物

使用说明:索取使用说明

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产品介绍

Protein G Focurose 4FF

为确保产品的性能和无忧的操作,使?#20204;?#35831;仔细阅读本手册,有任?#25105;晌是?#21672;询本公司售后技术支持或当地的销售人?#20445;?#32852;系方式见附录)。

1.产品介绍

Protein G Focurose 4FF适用于分离纯化腹水、细胞培养上清、血清来源的单抗、多抗及Fc标签蛋白等。

特点如下:

a.快速、简单(一步纯化)。

b.载量高、流速快、易于放大。

c.Protein A Focurose 4FF相比,IgG结合面(更多的物种来源)更广,结合能力更强(见表2)。

表1:性能?#38382;?/span>

基质

高度交联4%的琼脂糖

粒径范围

45-165μm

平均粒径

90μm

结合载量

25mg(人IgG)/ml(介质)

pH稳定性

3-9(长期) 2-10(短期)

化学稳定性

所有常用缓冲溶液中稳定

流速

300cm/h

操作压力

0.3MPa

贮存溶液

20%乙醇

贮存温度

4-8

备注:

1.介质的结合载量会因样本的来源和亚型的变化而变化。

2.介质如果长时间浸泡在洗脱液中,会导致配基水解,最终影响介质载量。

表2:Protein A和 Protein G与不同?#36136;鬒gG的结合强度

种类

亚类

Protein A

Protein G

IgA

可变

-

IgD

-

-

IgE

-

-

IgG1

++++

++++

IgG2

++++

++++

IgG3

-

++++

IgG4

++++

++++

IgM

可变

-

豚鼠

IgG1

++++

++

IgG2

++++

++

?#36136;?/span>

/

+

++

小鼠

IgG1

+

++++

IgG2a

++++

++++

IgG2b

+++

+++

IgG3

++

+++

IgM

可变

-

大鼠

IgG1

-

+

IgG2a

-

++++

IgG2b

-

++

IgG3

+

++

/

++++

+++

禽蛋黄

IgY

-

-

/

++

+

/

+++

+++

/

++

++++

/

++

++++

绵羊

/

-/+

++

山羊

/

-

++

猴子

/

++++

++++

骆驼

/

-

+

/

-

+

“-?#20445;?#19981;结合

“+?#20445;?#24369;结合

“++?#20445;?#32467;合

“+++?#20445;?#20013;等结合

“++++?#20445;?#24378;结合

 

2.使用(以HT 1ml和HT 5ml为例)

a.水洗

用5-10CV纯化水0.5ml/min(HT1ml)或2.0ml/min(HT 5ml)清洗介质

备注:此步骤用于去除介质中20%乙醇。

b.?#33014;?/span>

用5-10CV?#33014;?#28082;以0.5ml/min(HT1ml)或2.0ml/min(HT5ml)?#33014;?#20171;质,直至基线平稳后调零。

备注:此步骤用于?#33014;?#20171;质,保证介质中的溶液的组分和pH与样本一致

c.上样

样品经过离心、过滤(0.45um)后以0.5ml/min(1ml)或2.0ml/min(5ml)进行上样,上样完成后用?#33014;?#28082;清洗直至基线为零。

备注:蛋白的结合能力随着IgG物种来源、亚型、样品浓?#21462;?#27969;速、pH变化而变化,低流速常常能增加样本的结合效率。腹水必须要经过高速离心(至少11500rpm*30min,去除大量脂类)、稀释(至少3倍,推荐5-10倍-洗脱样本纯度会更高)、过滤后上样;血清必须要经过稀释(至少2倍,推荐5-10倍-洗脱样本纯度会更高)、过滤后上样。

d.洗脱

用5-10CV洗脱液以0.5ml/min(1ml)或2.0ml/min(5ml)进行洗脱,收集洗脱液,洗脱完成后用中和液(50-200ul中和液/ml洗脱液)将洗脱液pH调节至中性(也可以预先加在收集管中)。

备注:低流速常常能增加洗脱液中目标蛋白的浓度

e.水洗

用5-10CV纯化水以0.5ml/min(1ml)或2.0ml/min(5ml)清洗介质

备注:此步骤用于去除介质中洗脱液。

f.保存

用5-10CV 20%乙?#23478;?.5ml/min(1ml)或2.0ml/min(5ml)清洗介质后4-8保存。

备注:20%乙醇可以防止微生物的生长

g.溶液配制

?#33014;?#28082;:0.02M PB,调节pH 7.0-7.4,4-8保存

备注:?#33014;?#28082;配制完成后务必确保pH为7.0,当样本所在溶液的pH?#31995;?/span>?#20445;?#19968;些来源的样本与介质作用较弱甚至是无效的(见表2);若洗脱液中有杂质蛋白?#20445;?#24314;议在?#33014;?#28082;中添加0.3M NaCl;一般来说,此?#33014;?#28082;可以适用绝大数的目标物的分离纯化(如有特殊情况,可以根据样本的来源和亚型,可以有争对性的调整?#33014;?#28082;的pH和?#38395;?#24230;)。

洗脱液:0.1M Glycine-HCl,pH2.7,4-8℃保存

备注?#21512;?#33073;液极易滋生微生物,最好现配现用,4-8℃保存

中和液:1.0M Tris-HCl,pH 9.0。

备注:中和液用于调节pH,避免抗体在过酸环境中失活,室温保存

3.清洗

清洗后可以去除一些强结合性物质(例如极少量强结合的抗体、变性蛋白、脂类等),从而达?#20132;?#22797;介质的优良性能(例如载量、流动性、柱效等)。

建议每使用10-20次后进行清洗(常规清洗流程:a→b→e;剧烈清洗流程:a→b→c→d→e,具体清洗频?#24066;?#26681;据纯化的初始样品的洁净度进行调整。

a.10-20倍柱体积的酸清洗液(O.05M 甘氨酸、0.5M NaCl,pH 2.5)冲洗后,立即用5-10倍柱体积纯化水冲洗。

备注:用于去除强结合的抗体、变性蛋白等。

b.用10-20倍柱体积的碱清洗液(0.1M Tris-HCl、0.5M NaCl,pH 9.0)冲洗后,立即用5-10倍柱体积纯化水冲洗。

备注:用于去除聚集在介质中的沉淀、变性蛋白。

c.用5-10倍柱体积的6M盐酸?#39029;?#27927;后,立即用5-10倍柱体积纯化水冲洗

d.用5-10倍柱体积的70%乙醇冲洗后,立即用5-10倍柱体积纯化水冲洗。

e.用5-10倍柱体积的20%乙醇冲洗后4-8保存。

备注:20%乙醇可以防止微生物的生长

4.应用案例

案例一



5.常见问题

表3:常见问题及解决方案

问题

可能原因

解决方案

纯化时目标物不与介质结合

或结合量?#31995;?/span>

1.上样?#25239;?#36733;

降低上样量

2.上样速度过快

降低上样流速

3.蛋白或脂类在介质中聚

及时有效地清洗介质或更换新的介质

4.目标物和介质结合力弱

确认IgG来源及亚型,选择正确的介质

5.纯化时选择的缓冲液不合适

确认样本中的pH,结合力弱的目标物可以通过调高pH(8-9)和增加?#38395;?#24230;(1-3M NaCl)来提高样本和介质的结合力

洗脱时没有收集到目标物

或只收集到少量目标物

1.目标物没有与介质结合或结合量较少

?#28909;?#35748;目标物是否与介质结合

2.洗脱条件不合适

降低洗脱液pH至2.5-3.0

3.洗脱时间不够

降低流速,延长洗脱液的保留时间

4.洗脱体积过小

加大洗脱体积

目标物纯度?#31995;?/span>

 

1.样品没有经过前处理

根据样品的来源,上柱前必须要经过离心、过滤或稀释

2.样品粘度过高

用?#33014;?#28082;适当的稀释样品,降低样品粘度和浓?#21462;?/span>

3.洗杂不彻底

加大洗杂体积直至基线平稳并与?#33014;?#28082;一致

4.杂质蛋白或脂类在介质中聚集沉淀

及时有效地清洗介质

5.目标物出现降解

注意样本纯化前后的保存条件,不得在高温、过酸、过碱条件长时间放置

6.柱料装填效果不佳

重新装填或购买

7.分离柱顶部有较大储样体积

重新装柱或降低储样体积

8.介质中有微生物生长

介质使用完后,请及时正确保存介质

介质载量下降

1.上样速度过快

降低上样流速

2.蛋白或脂类在介质中聚集,导致载量下降

及时清洗介质

3.使用?#38382;?#36807;多,配基逐渐脱落

更换新介质

色谱峰上升缓慢

介质装填过紧

重新装柱

色谱峰拖尾

介质装填太松

重新装柱

柱床有裂缝或干涸

出?#20013;?#38706;或大体积气泡引入

检查管路是否有泄露或气泡,重新装柱

液流?#19979;?/span>

1.蛋白或脂类聚集

及时清洗介质或?#22235;?/span>

2.分离柱中微生物生长

所用试剂必须经过过滤和脱气;

样品上柱前必须离心或过滤

6.订购信息

表4:订购信息表

产品

规格(ml)

货号

Protein G Focurose 4FF

5

HZ1012-1

Protein G Focurose 4FF

25

HZ1012-1

Protein G Focurose 4FF

100

HZ1012-1

Protein G Focurose 4FF

500

HZ1012-1

Protein G Focurose 4FF

1000

HZ1012-1

备注:大规格包装产品或其它产品购买,请咨询本公司当地销售或售前技术支持。

7.联系方式

武汉汇研生物科技股份有限公司

地址:武汉市东湖新技术开发区流芳园?#19979;?8号新特工业园

电话:027-8777 2229

网址:www.kw830.com

邮箱:[email protected]




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